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《食品科学》:南昌大学刘成梅教授等:阿魏酰阿拉伯低

发布时间:2024-04-04 23:32:45 来源:永乐国际app官方网站 作者:永乐国际网站首页登录

  阿魏酰低聚糖(FOs)是指低聚糖侧链部分被阿魏酸取代的一类低聚糖,被美国食品和药品管理局(FDA)认定为具有阿魏酸和低聚糖的双重生理活性。其中,阿魏酰阿拉伯低聚木糖(F-AXOs)是最常见的一类FOs,其主链由木糖构成,侧链连接有阿拉伯糖基。F-AXOs可作为烘焙食品、饮料、面食等食品的配料,提高食品的功能特性和营养特性,应用前景广阔。谷物作为人类的主食,每年被大量地生产和消耗,同时在谷物碾磨的过程中也产生了大量的谷物麸皮等副产物。谷物麸皮中含有丰富的阿魏酸和阿拉伯木聚糖,是制备F-AXOs的良好原料。

  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室的邓奉红、胡秀婷、刘成梅*等人 对以谷物麸皮为原料制备F-AXOs的方法、F-AXOs的结构鉴定手段以及已知的F-AXOs结构进行了综述,最后重点阐述F-AXOs结构与生物活性之间的关系,并介绍F-AXOs在食品领域中的应用情况,以期为F-AXOs的生产与应用提供理论指导。

  F-AXOs通常由水解富含阿魏酰阿拉伯木聚糖(F-AXs)的不溶性膳食纤维得到,是F-AXs部分水解的产物。因此,F-AXs的结构决定了F-AXOs的结构。F-AXs主要存在于单子叶禾本科植物的细胞壁中。由于麸皮部分的细胞壁比胚乳部分厚,F-AXs在谷物麸皮中的含量大于其在胚乳中的含量,故麸皮是F-AXs的主要来源。麸皮包括种皮、果皮、糊粉层等部分,其中糊粉层细胞是厚壁细胞,其细胞壁基质主要由阿拉伯木聚糖和β-葡聚糖构成,且积累了大量营养物质,因此,糊粉层中的F-AXs含量最高。在不同的禾本科单子叶植物中,F-AXs的含量不同:F-AXs在玉米麸皮中约占24%,在黑麦、大麦、小麦麸皮中约占10%~16%,在米糠和燕麦麸皮中则分别只占7%和5%。

  图1展示了F-AXs的一般结构,F-AXs主链是D-吡喃木糖由β-(1,4)糖苷键连接而成,α-L-呋喃阿拉伯糖通过α-(1,2)和/或α-(1,3)糖苷键与部分木糖的2/3号位连接形成侧链,部分阿拉伯糖残基5号位通过酯键或醚键与阿魏酸相连。阿魏酸是F-AXs重要的组成部分。阿魏酸残基之间可以发生自由基偶联反应,生成阿魏酸脱氢二聚体,使阿拉伯木聚糖分子内或分子间交联,从而达到稳定和加强植物细胞壁中的阿拉伯木聚糖链的作用;或与木质素、蛋白质交联,形成更复杂的聚合物,以维持细胞壁的刚性结构。这也导致了F-AXs多以不可溶的形式存在,可溶性F-AXs仅占总F-AXs的10%左右。因此,将F-AXs转变为可溶性的F-AXOs对于扩大谷物麸皮在食品中的应用范围、提高其附加值具有重要的意义。

  自水解法是指水在高温或高压作用下,解离产生水合氢离子,其可作为一种弱酸裂解阿拉伯木聚糖主链上的乙酰基和醛基,这促进了乙酸和糖醛酸的生成,进而催化F-AXs的水解,最终生成F-AXOs。一般通过剧烈的物理手段实现该过程,目前自水解的主要手段有微波、蒸汽爆破、加压热水法等。

  酸水解法是指利用酸水解富含F-AXs的原料制备F-AXOs。值得注意的是,强酸水解也可导致阿魏酸的释放。因此目前多采用可控的温和酸水解法制备F-AXOs,主要是利用低浓度的草酸和三氟乙酸。

  目前,生物法主要有生物发酵法和生物酶法。生物发酵法是指将产木聚糖酶的微生物接种到含有F-AXs的培养基中进行发酵,微生物产生的酶直接作用于F-AXs从而制备F-AXOs。但生物发酵法耗时长,限制了其在食品工业中的应用。

  生物酶法是指利用酶断裂糖苷键的作用将多糖水解为低聚糖。目前用于制备F-AXOs的水解酶主要是糖苷水解酶(GH)家族,如木聚糖酶,以及包括木聚糖酶在内的混合酶系,如崩溃酶、纤维素酶、半纤维素酶等。其中,使用最多的酶是GH10、GH11中的内切β-1,4-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)。这类酶可催化F-AXs的木聚糖骨架中木糖残基之间β-(1,4)糖苷键的断裂,从而产生不同取代或未取代的低聚木糖。GH10内切β-1,4-木聚糖酶水解F-AXs的产物通常是阿魏酰化阿拉伯糖取代基在非还原端的木二糖,而GH11内切β-1,4-木聚糖酶水解F-AXs的产物通常是阿魏酰化阿拉伯糖取代基在非还原端第二位的木四糖,且内切β-1,4-木聚糖酶GH10、GH11都能在中间木糖上释放1个含有阿魏酰化阿拉伯糖取代基的木三糖。由此可见,木聚糖酶水解的产物聚合度多在2~4之间,具有较好的均一性。

  然而,半纤维素与纤维素或木质素之间存在高度支化和桥接,形成了空间位阻,阻碍了酶与底物中间体的形成,从而降低了木聚糖酶对麸皮的水解效率。因此,常采用多种酶联合处理或物理结合酶处理以提高F-AXOs的得率。纤维素酶和木聚糖酶联用能够更有效地释放麸皮中的F-AXOs,这是因为纤维素酶能够分解结晶纤维素,使其暴露木聚糖结构,有利于木聚糖酶的水解。此外,挤压、超声、高温高压蒸煮、亚临界水萃取等物理预处理可以破坏纤维之间的紧密结合,暴露酶的作用位点,从而提高酶法水解谷物麸皮制备F-AXOs的得率。

  目前常使用大孔树脂或活性炭对F-AXOs进行初步纯化。最常使用的是Amberlite XAD-2大孔树脂。Amberlite XAD-2是一种非极性大孔树脂,可吸附芳香族化合物。上样之后,通常用蒸馏水和体积分数为50%的醇溶液分别洗脱,蒸馏水可洗脱除去未阿魏酰化的AXOs,体积分数为50%的醇溶液则可将阿魏酰化的AXOs从树脂上洗脱下来。因此,收集体积分数为50%的醇溶液组分,浓缩冻干,即可得到初步纯化的F-AXOs。此时,F-AXOs是不同聚合度F-AXOs的混合物。

  若要获得单一聚合度的F-AXOs,可用凝胶柱层析进行进一步分离。目前最常使用的是Sephadex LH-20凝胶。凝胶柱层析根据分子筛效应对不同分子质量样品进行分离,小分子质量的物质进入凝胶内,在柱上的流动时间长,故大分子质量的物质先被洗脱,小分子质量的物质后被洗脱。通过绘制洗脱曲线,收集单一峰组分,反复进行凝胶柱层析,直到洗脱峰完全对称,即可认为获得了单一聚合度的F-AXOs。此外,反相高效液相色谱也可用于F-AXOs的进一步分离。不同聚合度的F-AXOs极性不同,导致其在流动相和固定相中的分配不同,极性越大,保留时间越短,由此将不同聚合度的F-AXOs进一步分离。

  一般的,糖分子中不含生色基团,没有紫外吸收峰。游离阿魏酸由于含有苯环和共轭体系而具有紫外吸收。因此,F-AXOs因含阿魏酸而具有紫外吸收。此外,在F-AXOs中阿魏酸与糖分子形成酯键,这使得最大吸收峰红移,并且导致吸光度增大。

  红外光谱扫描可得到被测物质官能团的信息,故红外光谱可用于鉴定F-AXOs特有的阿拉伯糖、木糖和阿魏酸的官能团。

  如前所述,F-AXOs由阿魏酸和AXOs两部分组成,故一般先水解F-AXOs测定其中的阿魏酸含量,再对糖链部分进行结构解析。

  F-AXOs中的阿魏酸是以结合形式存在的,测定其中的阿魏酸含量需要在碱性环境下进行皂化反应,这是因为碱可断裂阿魏酸与阿拉伯糖基之间的酯键或醚键,将结合阿魏酸转变为游离阿魏酸。再将乙酸乙酯萃取得到的游离阿魏酸吹干、甲醇复溶,以阿魏酸标准品为对照进行液相色谱分析,即可测得F-AXOs中阿魏酸的含量。

  单糖组成的测定是将AXOs水解成单糖,然后利用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)法或气相色谱(GC)进行测定。其中,HPAEC-PAD对糖类物质的检测具有很高的灵敏度和很低的检出限,这是由于糖类遇碱后阴离子化,在恒定电位的安培检测器中有响应值。而GC测定则需要对单糖进行衍生化处理,操作复杂、耗时长。对于F-AXOs,其主链由木糖组成,侧链连接有阿拉伯糖,故常以阿拉伯糖与木糖(A/X)的比例反映其分支程度,A/X比例越大表明F-AXOs的分支程度越大。此外,除木糖与阿拉伯糖之外的单糖成分也可以表征F-AXOs支链的复杂程度。

  F-AXOs的平均聚合度(avDP)可根据还原糖/总糖含量进行计算,以确定F-AXOs总体聚合度的高低。具体的聚合度分布可用不同聚合度的木糖为标准品进行HPAEC-PAD分析,根据出峰时间定性,峰面积定量。但由于木糖标准品聚合度有限,更高聚合度的F-AXOs无法用HPAEC-PAD分析进行对照定性。质谱在聚合度和相对分子质量解析方面也具有重要的应用。

  在糖类精细结构的解析方面,核磁共振波谱法(NMR)发挥了重要的作用,NMR分为1D NMR(1H NMR和13C NMR)和2D NMR,它可以提供糖类连接方式和构型等多方面的信息。

  目前已从小麦麸皮、米糠、黑麦麸皮、玉米麸皮、燕麦麸皮、大麦麸皮、小米麸皮、竹子等物质中制备分离得到多种F-AXOs,图2展示了这些F-AXOs的结构。其中均分离得到了O-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-O-[5-O-(反式-阿魏酸)-α-L-呋喃型阿拉伯糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-D-吡喃型木糖(F-AXOs-1),根据来源和提取方式的不同,其主链木糖数量在2~4个之间。小麦麸皮是制备F-AXOs的主要原料。目前,以小麦麸皮为原料制得的F-AXOs还包括O-α-L-呋喃型阿拉伯糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-O-[5-O-(反式-阿魏酸)-α-L-呋喃型阿拉伯糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-D-吡喃型木糖(F-AXOs-2)、5-O-(反式-阿魏酸)-α-L-呋喃型阿拉伯糖基-(2→1)-D-吡喃型木糖(F-AXOs-3)、3-O-乙酰-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-O-[5-O-(反式-阿魏酸)-α-L-呋喃型阿拉伯糖基-(1→3)]-O-β-D-吡喃型木糖基-(1→4)-D-吡喃型木糖(F-AXOs-4)。利用玉米麸皮制备的F-AXOs结构更加复杂,其中阿魏酸多以脱氢二聚体的形式存在,常通过5-5(F-AXOs-5)、8-O-4(F-AXOs-6)、8-8C(F-AXOs-7)之间的偶联形成。此。

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