生物膜( biofilm，BF) 是指微生物在生长过程中附着于固体表面形成的由微生物的细胞及其分泌的聚合物所组成的多细胞复合体。目前研究数据证实，大多数感染性疾病中，致病性微生物的存在方式均是以生物膜状态为主。生物膜的形成大大增强了致病性微生物对不利环境、宿主免疫及抗菌药物的抵抗力，是慢性长期感染、反复感染的主要原因。因此研究生物膜对临床疾病的诊疗具有十分重要的意义。

　　结晶紫染色法是检测生物膜的常用方法之一，简单、方便、准确性相对较高，可对生物膜总量进行半定量分析，通过结晶紫染色初筛后，可再行电子扫描电镜、激光共聚焦显微镜等进行确定生物膜显微形态的改变。

　　1. 细胞培养板中加入细菌 100μL/孔(约 104)，置 37°C细菌培养箱培养24~48 小时，至细菌形成成熟生物膜。

　　4. 漂洗去除浮游态菌体，加入甲醇固定15min，风干后加入1ml 0.1%结晶紫染色15min